氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究

【摘要】：旨在探究氯化钴（CoCl_(2)）诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料，使用化学性低氧模型诱导剂CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl_(2)最适处理浓度，用200 μmol·L~(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞12 h，将培养出的传代细胞分成4组处理，分别为：对照组、CoCl_(2)诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl_(2)联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h，CoCl_(2)诱导缺氧处理组给予终浓度200 μmol·L~(-1) CoCl_(2)的培养基培养12 h，单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L~(-1)的GSH处理12 h，GSH+CoCl_(2)联合处理组加入200 μmol·L-1 CoCl_(2)和2 mmol·L~(-1)的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性；采用双氯荧光素（2'，7'-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）检测ROS水平；Western blot检测γH2AX蛋白活性水平，采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl_(2)诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系，本试验在CoCl_(2)处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比，200 μmol·L~(-1) CoCl_(2)处理猪卵泡颗粒细胞后，细胞增殖活力极显著降低（P0.000 1），缺氧组ROS水平极显著升高（P0.000 1），γH2AX蛋白表达极显著升高（P0.000 1），Oxo-8-G水平极显著升高（P0.000 1）。与缺氧组相比，在CoCl_(2)处理基础上添加GSH后，ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低（P0.000 1），并伴随细胞增殖活性的显著恢复（P0.000 1）。CoCl_(2)可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性，机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。